单克隆抗体的制备步骤

免疫动物是用靶抗原免疫小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应的B淋巴细胞克隆、活化、增殖并分化为致敏B淋巴细胞。

2、细胞融合:

用二氧化碳气体杀死小鼠，无菌操作取出脾脏，在培养皿中挤压研磨，制备脾细胞悬液。将制备的同源骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，加入融合促进剂聚乙二醇。在聚乙二醇的作用下，各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞。

3.选择性文化:

选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般使用HAT选择性培养基。

4.杂交瘤阳性克隆的筛选和克隆:

只有少数在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞分泌具有预定特异性的单克隆抗体，因此必须对其进行筛选和克隆。有限稀释法通常用于克隆杂交瘤细胞。

5.单克隆抗体的大量制备:

大量的单克隆抗体主要是通过动物体内诱导和体外培养制备的。

扩展数据:

单克隆抗体的优势:

1.杂交瘤可以在体外“永久”存活并传代。只要细胞系不发生基因突变，就能持续产生高特异性和均一性的抗体。

2.可以从相对不纯的抗原中获得大量高度特异性和均一性的抗体。

3.因为可以获得“无限”的均质抗体，所以适用于以标记抗体为特征的免疫学分析方法。

4.由于其高特异性和单一的生物学功能，单克隆抗体可用于体内放射免疫显像和免疫导向治疗。

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