生化试题

在pH4.8电泳缓冲液条件下，带有不同量磷酸基团的AMP、ADP、ATP解离，带负电荷的顺序为ATP > ADP > AMP，在电场中运动速度不同，因此被分离。此外，利用核苷酸物质碱基的紫外吸收特性，将分离的电泳乙酸膜置于紫外灯下，可以看到暗红色斑点。根据相同条件下标准样品的电泳条件，对混合样品的分离组分进行鉴定。

三、仪器和试剂

1仪器

(1)电泳仪器和电泳槽(平板式)

(2)紫外线灯

(3)吹风机和医用镊子

(4)醋酸纤维素薄膜(8厘米×12厘米)

(5)微量取样器(10微升或50微升)

2.试剂

(1)柠檬酸缓冲液(pH4.8):称取8.4g柠檬酸和17.6g柠檬酸钠，溶于蒸馏水中，稀释至2000mL。

(2)腺苷酸标准溶液:将纯AMP、ADP、ATP分别用蒸馏水配制成100mg/10mL溶液。其中AMP需要稍微加热帮助溶解。把冰箱放在一边。

(3)混合腺苷溶液:将1份上述标准溶液AMP、ADP和ATP分别混合均匀。把冰箱放在一边。

四、操作步骤

1.取样:将醋酸纤维素膜放入pH4.8的柠檬酸缓冲液中，待膜完全浸湿后(约0.5h)用镊子取出，放在干净的滤纸中间，轻轻吸去多余的缓冲液，仔细辨认膜的磨砂面，用微量取样器在磨砂面上取样。采样点距离薄膜一端1.5cm，采样点间距1.5cm，采样量为2~3 μ l，按照少量多次的原则分2~3次完成。

2.电泳:在两个电泳槽中注入pH值为4.8的柠檬酸缓冲液，缓冲液的高度约为电泳槽深度的3/4。(注:两个槽中的电泳液位相同)。用与膜等宽的滤纸作为“滤纸桥”连接醋酸纤维素膜和双极缓冲液。滤纸被缓冲液完全浸湿后，将样品膜的磨砂面朝下贴在电泳槽支架的“滤纸桥”上。

将取样端负向放置，盖上电泳槽盖，打开电源，在电压降至10V/cm的情况下进行电泳。一小时后，关闭电源，取出醋酸纤维素膜，用吹风机吹干。

3.鉴别:用镊子小心地将干膜放在紫外灯下，用铅笔划出腺苷电泳斑点，并标出每个斑点的腺苷编码。

绘制了三种标准核苷酸和样品的电泳图谱，通过标准单核苷酸的迁移率来鉴定样品中的组分。

动词 （verb的缩写）附加注释

1.电泳前，一定要检查电极的正负极和膜的方向，确保负极接在膜的取样端，因为样品带负电，打开电源后，样品要游到膜上的正极；确保薄膜无光泽的一面朝下。

2.取样时，取样点的大小应控制在直径2~3mm，取样点不能过大，否则电泳后观察结果不理想。