河南省生物联考真题
(1)限制性酶分析。该方法利用限制性内切酶和特异性DNA探针检测是否存在基因变异。当待测DNA序列发生突变时，一些限制性酶切位点会发生变化，其特定限制性酶切片段的状态也会在电泳淌度上发生变化，从而可以进行分析诊断。
(2)DNA限制性片段长度多态性分析。在人类基因组中，平均约200对碱基可以发生一对突变(称为中性突变)，导致个体之间核苷酸序列的差异，称为DNA多态性。许多DNA多态性发生在限制性内切酶的识别位点。这个DNA片段的酶促水解会产生不同长度的片段，这被称为限制性片段长度多态性(RFLP)。RFLR以孟德尔方式遗传。在一个特定的家族中，如果一个致病基因与一个特定的多态性片段紧密连锁，这个多态性片段可以作为一个“遗传标记”来判断家族成员或胎儿是否是致病基因的携带者。血友病A、囊性纤维化和苯丙酮尿症都可以通过这种方法进行诊断。
(3)等位基因特异性寡核苷酸探针杂交。遗传病的遗传基础是基因序列发生一个或多个突变。根据已知基因突变位点的核苷酸序列，人工合成两种寡核苷酸探针:一种是突变基因碱基序列对应的寡核苷酸；第二，使用对应于正常基因碱基序列的寡核苷酸分别与受试者的DNA杂交。从而检测受试者的基因是否发生突变以及是否存在新的突变类型。
根据问题的意思，第一种或第二种方法都可以，所以检测过程中必须使用限制性内切酶。但其实这个问题上的分数还是挺严重的。高考结束后，我简单统计了一下，一个成绩中等的班级，总人数是41，只有6个同学选择了c的正确答案，大部分同学都选错了A，选错A的同学其实主要考虑的是DNA杂交技术。他们知道，DNA杂交技术是通过一定的技术手段，将两种生物的单链DNA放在一起。如果这两条单链有互补的碱基序列，那么在没有互补碱基序列的地方，仍然有两条自由的单链。DNA杂交用的是DNA单链，所以同学们考虑用解旋酶把DNA解旋成单链，但是同学们忘了，只要把不同来源的DNA加热到100℃或者把pH调到13以上，双链DNA分子之间的氢键就会断裂，退化成单链，所以实际上不需要解旋酶。
选择c:限制性核酸内切酶
限制性核酸内切酶:一种在特定核苷酸序列水解双链DNA的核酸内切酶。I型限制性内切酶不仅催化宿主DNA的甲基化，还催化未甲基化DNA的水解。然而，II型限制酶仅催化未甲基化DNA的水解。
镰状细胞性贫血:血红蛋白β链N端的第6个氨基酸由谷氨酸变为缬氨酸。结构基因中对应的核苷酸从正常的CTT变成了CAT，所以mRNA上的密码子也发生了变化，导致蛋白质多肽链合成错误。
正常第六个密码子周围的核苷酸序列是CCT-GAG-GAG，是限制性内切酶Mst2的识别序列。用Mst2水解正常基因会产生1.1.5 KB和0.20kb两个片段，用32P标记？-珠蛋白基因作为探针，经水结和电泳后与Mst2的片段杂交。如果在1.15kb和0.20kb有两条杂交带，说明该基因没有突变。相反，只有一条杂交带表明修饰位点发生了突变。
解旋酶只是将它解旋，除此之外，它还可以被热解旋。所以，a不是必须的。
这个问题也有点考过了，因为镰状贫血患者在酶切位点有一个突变，所以突变之后酶切点就消失了。酶消化后，产生新的长片段。如果是杂合子，会有两种片段，一种是长的，一种是短的。
正常人是两个短的，纯合子是两个长的。